Біомаркери нейродегенерації від Roboscreen
Дослідження нейродегенеративних біомаркерів у крові відкриває нові можливості, але має окремі аналітичні складнощі. Багато цільових білків присутні у плазмі в дуже низькій концентрації.
Яка особливість дослідження маркерів нейродегенерації в крові?
Плазма та сироватка зручні для повторного відбору зразків. Проте робота з кров’ю має свої обмеження, особливо коли цільовий білок знаходиться в крові у невеликій кількості. Також плазма містить велику кількість інших білків і компонентів, які можуть впливати на подальше визначення маркера.
Один зі способів вирішити цю проблему — спочатку виділити потрібний маркер із плазми, а вже потім переходити до його визначення.
NeuroIP: імуноселективне збагачення маркерів нейродегенерації
Neuro IP Kit від Roboscreen призначений для попереднього збагачення біомаркерів із плазми. До набору входять магнітні імунобусинки з антитілами до обраного маркера.
Цільовий маркер звʼязується з антитілами на магнітних часточках. Магнітна сепарація дає змогу відокремити зв’язану фракцію та видалити частину компонентів плазми. З одним зразком крові можна послідовно використати декілька наборів нейроімунопреципітації, щоб отримати збагачені елюати на декілька маркерів.
З якими маркерами сумісні набори NeuroIP Roboscreen?
Для NeuroIP Roboscreen можна збагачувати наступні маркери:
- загальний Tau;
- p50-Tau;
- BD-Tau;
- β-амілоїд;
- загальний α-синуклеїн;
- патологічний олігомерний α-синуклеїн.
Після збагачення маркер можна визначати за допомогою різних аналітичних систем, зокрема з ІФА, Simoa, Lumipulse, Elecsys та MSD.
Дослідження Tau мозкового походження у крові при хворобі Альцгеймера
При дослідженні хвороби Альцгеймера важливо відокремити Tau, що походить із головного мозку, від його периферійних форм. У крові можуть бути присутні форми Tau периферійного походження, які можуть ускладнювати інтерпретацію результатів.
Для селективного виділення Tau мозкового походження з плазми або сироватки Roboscreen пропонує BD Tau Neuro IP Kit.
Ключова відмінність між мозковим Tau та периферійним Big Tau полягає у структурі білка. Мозкові ізоформи Tau не містять екзона 4a, тому екзони 4 і 5 у них розташовані безпосередньо один за одним.
У Big Tau між екзонами 4 і 5 присутній додатковий екзон 4a. Таким чином, структура цієї ділянки відрізняється: у мозковому Tau формується стик екзонів 4–5, тоді як у Big Tau послідовність має вигляд 4–4a–5.
Антитіло 2B8, що використовується у BD-Tau workflow Roboscreen, розпізнає саме ділянку стику екзонів 4–5. Завдяки цьому воно не розпізнає Big Tau, який містить екзон 4a, і дозволяє селективно виділити Tau мозкового походження.
Після імунопреципітації можна обрати подальше визначення. Для кількісного визначення BD-Tau використовується Human BD Tau Luminescence ELISA. Якщо завданням є дослідження p217-Tau у попередньо виділеній мозковій фракції, застосовується Human p217 Tau Luminescence ELISA.
Обидва тести використовують люмінесцентну детекцію. Для зчитування результатів потрібен мікропланшетний рідер із режимом люмінесценції або комбінований ІФА/ІХЛА аналізатор відкритого типу.
ІФА-набори Roboscreen для дослідження нейродегенерації
Лінійка Roboscreen не обмежується BD-Tau та BD-p217-Tau. Вона включає ІФА-набори для різних форм Tau, α-синуклеїну, пріонного білка та TDP43.
Це дозволяє підбирати маркери під конкретне дослідницьке завдання. Тип зразка та його підготовку потрібно перевіряти окремо для кожного набору.
| Набір | Що визначає |
|---|---|
| hTAU total ELISA | Загальний Tau. |
| phosphoTAU ELISA | Фосфорильований Tau. |
| non-pTAU ELISA | Фракцію Tau без фосфорилювання в позиціях T175/T181. |
| p231 TAU ELISA | Tau, фосфорильований у позиції T231. |
| TAU AGGREGATE ELISA | Агреговані форми Tau. |
| hSYN total ELISA | Загальний α-синуклеїн. |
| HUMAN alpha-Synuclein PATHO ELISA | Патологічні β-складчасті олігомери α-синуклеїну. |
| BetaPrion HUMAN ELISA | Загальний пріонний білок. |
| hTDP43 total ELISA | Загальний TDP43. |
Тип зразка, його підготовку та умови аналізу потрібно перевіряти за актуальною інструкцією конкретного набору.
Результати досліджень BD-Tau та BD-p217-Tau
Roboscreen досліджував обидва маркери після попереднього виділення Tau мозкового походження з плазми. Для кожного протоколу окремо порівнювали Aβ-позитивну групу хвороби Альцгеймера та Aβ-негативну контрольну групу.
В обох протоколах для імунопреципітації використовували 200 мкл плазми. Після цього концентрацію цільового маркера визначали за допомогою люмінесцентного ІФА.
BD-Tau
У дослідження увійшли 46 Aβ-позитивних зразків від пацієнтів із хворобою Альцгеймера та 22 Aβ-негативні контрольні зразки. Перед аналізом зразки були охарактеризовані за рівнями Aβ40/42, p181Tau та загального Tau у спинномозковій рідині.
| AUC | 0,922 |
| Чутливість | 82,6% |
| Специфічність | 86,4% |
| Порогове значення у дослідженій вибірці | >24,37 пг/мл |
Після BD-специфічної імунопреципітації рівень BD-Tau був вищим у групі хвороби Альцгеймера. Різниця між групами була статистично значущою, p<0,001.
BD-p217-Tau
Для BD-p217-Tau проаналізували 42 Aβ-позитивні зразки та 20 Aβ-негативних контрольних зразків. Tau мозкового походження також попередньо виділяли з 200 мкл плазми за BD-специфічним протоколом Neuro-IP.
Після цього в елюаті визначали p217-Tau. Його рівень також був вищим в Aβ-позитивній групі, а різниця між групами становила p<0,001.
| AUC | 0,910 |
| Чутливість | 85,7% |
| Специфічність | 90,0% |
| Порогове значення у дослідженій вибірці | >19,07 пг/мл |
У дослідженні Roboscreen рівень BD-p217-Tau був статистично значуще вищим у Aβ-позитивній групі з хворобою Альцгеймера порівняно з Aβ-негативною контрольною групою (p<0,001).
Плануєте дослідження нейродегенеративних біомаркерів?
Якщо ви плануєте дослідження нейродегенерації та вас зацікавили рішення Roboscreen, ми допоможемо підібрати продукти відповідно до завдань вашого проєкту.
